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Luís Lourenço Martins, Isabela Esteves de Campos, Célia Miguel Antunes, Ana Rodrigues Costa,
Ana Goicoa Valdevira, Ofélia Pereira Bento

pingando por ponto (dot) 2 μL de solução de extrato RESULTADOS
de cada carne a 500 μg/mL; v) as tiras de NC foram
bloqueadas 2×0,5 h em tampão de bloqueio (1% leite Os TID e a intensidade dos imunodots foram classifi-
em pó desnatado – 0,1% Tween -20, em tampão Tris cados de 1 a 4 e lidos, respetivamente, aos 15 min após
salino pH 7,4) à temperatura ambiente; vi) as tiras foram a administração e aos 30 min de revelação, por três ob-
incubadas durante 2 h com soros individuais a 1:10 em servadores separados, e os resultados positivos podem
tampão de bloqueio, seguido de lavagens de 4x5 min observar -se no Quadro 1. A representação dos 5 graus dos
com solução de lavagem (0,9% NaCl – 0,1% Tween -20); TID é exemplificada na Figura 1. A IgE específica média,
vii) foi realizada incubação durante 2 h com anticorpo em UAE, foi de 1665 (Der f), 297 (Der p), 2063 (Aca s),
monoclonal marcado com biotina a 1:1000 em tampão 1644 (Tyr p), 105 (Lep d), 547 (Dac g) e 601 (Phl p), con-
de bloqueio (AbDSerotec, Kidlington, Reino Unido), siderando um cut -off de 150 UAE. Os TID observaram -se
seguido de lavagem 4x5 min e 1 h de incubação com positivos em 5 doentes (Der f), 6 (Der p), 4 (Aca s), 1
ExtrAvidin -fosfatase alcalina (Sigma -Aldrich) a 1:5000; (Tyr p), 3 (Lep d), 4 (Dac g), 3 (Phl p), 10 (carne de vaca),
viii) as tiras de NC foram submetidas a um ciclo adicio- 5 (porco), 5 (borrego) e 6 (frango). Os imunodots IgE
nal de lavagem de 4x5 min e a visualização da marcação específicos revelaram -se positivos para todos os doentes,
IgE específica foi realizada por reação cromogénica com relativamente às carnes de vaca, porco e borrego, e, em
nitroazul de tetrazólio/5 -bromo -4 -cloro -3 -indolil fos- 8 deles, para frango (Figura 2). Foi possível uma semi-
fato (Sigma -Aldrich) em tampão substrato. Os contro- quantificação dos resultados dos imunodots, tendo -se
los de imunodot foram realizados sem soro e sem soro observado uma forte correlação positiva entre IgE espe-
e sem anti -IgE canina. cífica e TID para Der p (r = 0,881; p = 0,048), TID e

Quadro 1. IgE específicas positivas (≥150 UAE), resultados positivos dos TID e dos imunodots para as diferentes fontes alergénicas

Gramíneas Ácaros Alimentos
Cão Dac g Phl p Der f Der p Aca s Tyr p Lep d Vaca Porco Borrego Frango
N.º
IgE IDT IgE IDT IgE IDT IgE IDT IgE IDT IgE IDT IgE IDT IDT Dot IDT Dot IDT Dot IDT Dot
1 159 262 987 172 791 810 2 3 2 1

2 3 3 4 3 4 1
3 880 1685 1863 3 502 3 3733 4 3635 137 4 4 3 4 3 3 2
4 1 1 327 217 1 3 4 3 3 3 2 2
5 602 1 393 3481 403 1 3509 1 3478 142 2 3 4 4 3 3 2 2
6 205 4 4 4 4 3 3 2 2

7 4 4 4 2 3 3 3 4 3 2 4
8 2 3 3 3 3 1 1
9 1 1 1 1 2 4 4 3 1 3 1 1
10 3 4 1 3 1 1
11 3 3 3 3 4 1 4 2 4

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REVIST A POR TUGUESA DE IMUNO ALERGOLOGIA